随着流式细胞仪的不断发展及荧光染料的多样化,为进行多色流式提供了更多可能性,其优势包括同时检测单细胞上的多个标记物、收集丰富的细胞实验数据以及更加精确鉴别细胞群。同时,所需样本体积少、样本检测通量高,使流式细胞实验的效率明显提升,但检测更多抗原和荧光染料使多色流式配色更加复杂,在设计流式配色方案时,需重点关注如下要素:

仪器配置:在流式配色之前,务必了解您的仪器配置(激光器,滤光片);

染料亮度:不同染料之间荧光亮度不同,可通过染色指数进行对比,染色指数越高,亮度越高;

抗原表达与染料搭配:弱表达抗原搭配较亮荧光染料,强表达抗原可搭配较弱荧光染料;

光谱重叠尽量小:不同通道荧光染料搭配时,选择发射光谱重叠尽量小的染料;

荧光干扰:荧光互相干扰的荧光染料用来标记不同细胞,然后对其分别设门分析;

细胞活性检测染料:流式多色方案中应包含细胞活性检测染料,排除死细胞和细胞碎片。